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凝胶电泳制胶板 电泳胶板怎么做

1, 电泳胶板怎么做



根据分离要求确定是琼脂糖还是聚丙烯酰胺,根据分离分子的分子量确定浓度;
加水加热融化,装好梳齿,合适温度加入显色剂(或者跑完电泳染色),倒胶板。
以下为琼脂糖凝胶电泳的操作:
1 选择合适的水平式电泳槽,调节电泳槽平面至水平。检查稳压电源与正负极的线路;
2 选择孔径大小合适的点样梳子,垂直架在电泳胶模的一端,使点样梳子底部离电泳胶模底部的距离为1.0mm;
3 按待分离DNA,配制相应浓度琼脂糖,100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀;
4 用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好,防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生渗透。待琼脂糖凝胶冷却至50℃左右时,加入6μl核酸染料,摇匀,轻轻倒入电泳胶模中,琼脂糖凝胶的厚度在3~5mm。倒胶时要避免产生气泡,若有气泡可用吸管小心吸去;
5 琼脂糖凝胶凝固后,在室温放置20min,小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板,保持点样孔的完好;
6 将电泳胶模放入电泳槽中,加入电泳缓冲液,使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面1~2mm。如点样孔内有气泡,用吸管小心吸出,以免影响加样;
7 将10μl DNA样品与2μl体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合。上样缓冲液不仅可以提高样品的密度,使样品均匀沉到样品孔内,还可以使样品带颜色,便于上样和估计电泳时间和判断电泳的位置;
8 用微量移液器将样品小心加入加样孔内,记录样品点样秩序;
9 盖上电泳槽,开启电源开关,最高电压不超过5V/cm(100~150V恒压电泳),使DNA从负极向正极移动;
10 电泳时间随实验的具体要求而异。电泳一般需1~3小时。电泳完毕后关闭电源,戴一次性塑料手套取出凝胶,尽可能将所有的电泳缓冲液淋干,在254nm波长的透射紫外灯下观察。

2, 聚丙烯酰胺凝胶电泳 跑不好,跟胶板有关系吗?



您好!聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离效率影响因素较多,与胶板的直接关系不大。
① 堆积胶和分离胶的高度,这个基本上都是固定的,堆积胶大概2cm,剩下的都是分离胶。
② 聚丙烯酰胺的交联:保证丙烯酰胺的充分聚合,尤其是AP等不能失效。聚丙烯酰胺是热聚合,稍微注意下天气温度等。
③ 缓冲液:能用新鲜的缓冲液尽量用新鲜的。
④ 胶板一定要洗干净,如果有残留的碎胶,会影响分离效果。
这个最好有图贴上来,能根据实际情况看一下。
百度教育团队【海纳百川团】为您解答。
感谢您的采纳,O(∩_∩)O 如有疑问,欢迎追问。

3, 电泳如何制胶



1,制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1*TAE,瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液。
2,胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板。取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子。
将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子,将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。
3,室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1*TAE电泳缓冲液至没过胶板为止。
电泳原理
电泳是电泳涂料在阴阳两极,施加于电压作用下,带电荷的涂料离子移动到阴极,并与阴极表面所产生的碱性物质作用形成不溶解物,沉积于工件表面。
它包括四个过程:
1.电解
(分解)在阴极反应最初为电解反应,生成氢气及氢氧根离子OH ,此反应造成阴极面形成一高碱性边界层,当阳离子与氢氧根作用成为不溶于水的物质,涂膜沉积,方程式为:H2O→OH+H。
2.电泳动
(泳动、迁移)阳离子树脂及H+ 在电场作用下,向阴极移动,而阴离子向阳极移动过程。
3.电沉积
(析出)在被涂工件表面,阳离子树脂与阴极表面碱性作用,中和而析出不沉积物,沉积于被涂工件上。
4.电渗
(脱水)涂料固体与工件表面上的涂膜为半透明性的,具有多数毛细孔,水被从阴极涂膜中排渗出来,在电场作用下,引起涂膜脱水,而涂膜则吸附于工件表面,而完成整个电泳过程。
基本原理
生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移现象即所谓电泳。
如果把生物大分子的胶体溶液放在一个没有干扰的电场中,使颗粒具有恒定迁移速率的驱动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E。它们与介质的摩擦阻力f抗衡。在自由溶液中这种抗衡服从Stokes定律。
这里v是在介质粘度为η中半径为r的颗粒的移动速度。但在凝胶中,这种抗衡并不完全符合Stokes定律。F取决于介质中的其他因子,如凝胶厚度,颗粒大小,甚至介质的内渗等。
电泳迁移率(mbility)m规定为在电位梯度E的影响下,颗粒在时间t中的迁移距离d。
迁移率的不同提供了从混合物中分离物质的基础,迁移距离正比于迁移率。
参考资料来源:搜狗百科-电泳

名词解释


电泳

带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。 1807年,由俄国莫斯科大学的斐迪南·弗雷德里克·罗伊斯(FerdinandFrederic Reuss)最早发现。 1936年瑞典学者A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移动界面电泳仪 ,分离了马血清白蛋白的3种球蛋白,创建了电泳技术。

阴极

阴极(Cathode)是电化学反应的一个术语。指的是得电子的极,也就是发生还原反应的极。在原电池中,阴极是正极;电子由负极流向正极,电流由正极流向负极。溶液中的阳离子移向正极,阴离子移向负极。在电解池中阴极与电源的负极相连。阴极总是与阳极( Anode )相对应而存在的。

凝胶

凝胶是一种固体的、类似果冻的材料,是一种特殊的分散体系,它没有流动性,内部常含有大量液体。 凝胶可分为弹性凝胶和脆性凝胶,弹性凝胶失去分散介质后,体积显著缩小,而当重新吸收分散介质时,体积又重新膨胀,例如明胶等;脆性凝胶失去或重新吸收分散介质时,形状和体积都不改变,例如硅胶等。

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