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垂直电泳槽的安装视频 电泳槽怎么使用

1, 电泳槽怎么使用



电泳槽的使用方法
1、 将凝胶密封条框放在平板上,然后将凹型玻璃板与平板玻璃重叠
2、 将两块玻璃立起来使其底端接触桌面,用手将两块玻璃板夹住放入电泳槽内,然后插入斜楔板(直面对玻璃,斜面对槽)到适中程度,即可灌胶
3、凝胶凝结后,轻轻取下梳子
4、用手夹住两块玻璃板,上提斜楔板,使其松开,然后取下玻璃胶室去掉凝胶密封框,注意在上述过程中手始终给玻璃胶室一个压紧力,再将玻璃胶室凹面朝里置入电泳槽,插入斜楔板,将缓冲液加至内槽玻璃凹口以上,外槽缓冲液加到距玻璃上沿3mm处即可电泳,注意避免在胶室下端出现气泡
5、加样时可用加样器斜靠在提手边缘的凹槽内,以准确定位加样位置。盖好上盖,在电压150伏以下进行电泳分离,根据指示剂位置确定电泳时间。电泳结束后,关掉电源按住本体提手打开上盖,拔掉固定板,取出玻璃板,用刀片或薄板轻轻将玻璃夹层分开。本电泳槽同时可进行双板电泳,如果只跑一块胶时,需要在另外一侧用单胶替代板代替玻璃。

2, DYCZ28D垂直式电泳槽有关问题!!急...望有关专业人士解决!!



一、组成部件
(一)装有铂金丝的贮液槽一对,配有冷却装置及电泳缓冲液流出口。
(二)凹型橡胶框,配有玻璃板,可分别制作厚度为lmm、1.5mm的凝胶板,操作时根据需要选择适当厚度的玻璃板及梳子配套使用。
(三)样品孔模具(梳子)用于电泳加样。
(四)固定贮液槽的螺丝杆及螺母4对,28D、30型为5对。
(五)橡胶管五根。两根长的用于连接冷却水的出入口;中等长度的两根用于连接电极缓;中液的流出口;最短的一根用于连接贮液槽间的冷却水。
(六)导线1付。

二、使用方法
(一)清洗部件
上述部件组装前要彻底清洗干净。尤其是玻璃板及凹形带槽橡胶框,必须用泡沫海绵沾少许肥皂粉或洗涤剂彻底清洗干净。清洗后的玻璃板应放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。
(二)组装电泳槽
A、1、将四只固定螺杆插进一只贮液框(半上槽)的相应孔洞中,然后将贮液框仰放在桌上。
2、左手拿凹型槽橡胶模框,右手的拇指与中指握住玻璃板的两侧边缘插到橡胶模框内 (注意手指不能接触灌胶面的玻璃板)。
3、将带有玻璃的橡胶模框子放在仰放的贮液槽框架上,其下缘必须对齐贮液槽框下缘。
4、双手拿另一只贮液槽框与仰放在桌上的贮液槽框相合,并使橡胶框上的凸出线位于贮液槽有机玻璃框中央。
5、装上四只螺母,拧紧螺丝。注意拧紧螺丝时用力应均匀,最好用双手按斜角位置双双逐渐拧紧。
6、将电泳槽垂直竖起,放在桌上,带短玻璃板的贮液槽称上槽(阴极端),带长玻璃板的贮液槽称为下槽(阳极端),在长玻璃板与橡胶框间有一缝隙。此缝隙可用已熔化的10%琼脂沿长玻璃板下端灌入,为防止留存气泡,可稍抬起一端即可赶去气泡。待琼脂完全凝固后才能灌胶。
B、也可将槽垂直竖起,将带有玻璃的橡胶模框直接放入槽中,对称拧紧螺丝后,用琼脂封底边。
(三)灌胶
1、先灌分离胶,待凝固后再灌浓缩胶。灌胶前接通冷却水,夹紧连接上下贮液槽的两根橡胶管。
2、用细头滴管吸取胶液,沿长、短玻璃板中间缝隙从一端加入胶液。为防止产生气泡,可稍拾起另一端(气泡往高处走),不断加入胶液。若单层胶(分离胶)则加胶量约距离短玻璃板上端0.3厘米处,轻轻加少许水,双手轻轻将梳子插入,待胶凝后就可形成凹形加样孔。
3、为防止漏胶,在上、下贮液槽中立即加入蒸馏水,但蒸馏水不能超过短玻璃板上缘。
4、胶凝固后即可看到样品槽梳子与凝胶板间有一层折
射率不同的亮区。
(四)加样
1、松开连接上、下贮液槽两根橡皮管上的夹子,放掉槽内的蒸馏水,待水流完后,再夹紧夹子。
2、双手轻轻取出样品梳子,即可看到界线清楚的加样孔,将孔中水分吸去(注意千万不要碰坏孔沿的字面)。
3、在上、下贮液槽中加入缓;中液,液体高度应超过上贮液槽短玻璃板上缘。
4、用微量注射器吸取一定量的样品加到长、短玻璃板间的凹型凝胶样品孔内(注意加样动作要轻,针头不能碰坏胶面)。
(五)电泳
一贮液槽导线与电泳仪的负极相连,下贮液槽导线与电泳仪的正极相连。检查线路无误,方可按照所要求的电压电流进行电泳。
(六)取出胶板
电泳结束,旋松螺母,取出胶框,剥出玻璃板,在两块玻璃板下角空隙内,用刀片背面轻轻撬动,即可将胶面与一块玻璃板分开,将有胶板的玻璃板平放在桌上,双手轻轻沿凝胶底将胶片托起,放在大培养皿中染色,胶板经漂洗、脱色后即可看到清晰的分离条带。
注:DYCZ—28B、29型夹芯式电泳槽使用方法与此相同。DYCZ—28C型、28D型和30型电泳槽使用方法也与此相同,因是制作两块胶板,故实际形成三个贮液槽。请注意在操作时两个胶室的短玻璃板都要向里,中间为负极,两边为正极。
注意.可作两块胶的电泳槽,在作一块胶时,应将三头导线都插在电泳槽上,以免放在桌上误碰。

3, 垂直式蛋白质电泳的操作步骤?



实验试剂和器材
1.材料: 低分子量标准蛋白试剂盒: 低分子量标准蛋白: 兔磷酸化酶B MW=97,400 牛血清白蛋白 MW=66,200 兔肌动蛋白 MW=43,000 牛碳酸酐酶 MW=31,000 胰蛋白酶抑制剂 MW=20,100 鸡蛋清溶菌酶 MW=14,400 开封后溶于200µl蒸馏水,置-20℃保存,使用前室温融化,沸水浴中加热3-5分钟后上样。 样品1:称3mg样品1,加2 ml蒸馏水溶解。
2.实验试剂
(1) 30%丙烯酰胺(Acr):称Acr30g,甲叉双丙烯酰胺 (Bis)0.8g,加蒸馏水至100ml,过滤后置棕色瓶中, 4℃贮存可用1-2月。
(2)10%SDS(十二烷基磺酸钠)
(3)1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液:称取Tris18.2g, 加入50ml水,用1mol/L盐酸调pH8.8, 最后用蒸馏水定容至100ml。
(4)1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液:称取Tris12.1g,加 入50ml水,用1mol/L盐酸调pH6.8, 最后用蒸馏水定容至100ml。
(5)0.05mol/LpH8.0Tris-HCl缓冲液:称取Tris0.6g,加 入50ml水,用1mol/L盐酸调pH8.0,最后用蒸馏水定容至100ml。
(7)10%过硫酸铵(AP)
(8)TEMED(四甲基乙二胺)
(9)样品溶解液:SDS(100mg)+巯基乙醇(0.1ml)+ 溴酚蓝(2mg)+甘油(2g) +0.05mol/L pH8.0Tris-HCl(2ml),最后定容至10ml。
(10)固定液:取50%甲醇454ml,冰乙酸46ml混匀。
(11)染色液:称取考马斯亮蓝R250 0.125g,加上述固定液 250ml,过滤后备用。
(12)脱色液:冰乙酸75ml,甲醇50ml,加蒸馏水定容至1000ml。
(13)电极缓冲液(内含0.1%SDS,0.05mol/LTris- 0.384mol/L甘氨酸缓冲液pH8.3):称Tris6.0g,甘 氨酸28.8g,加入SDS1g,加蒸馏水使其溶解后定容至1000ml。
实验过程
1.将玻璃板用蒸馏水洗净晾干, 准备2个干净的锥形瓶.
2.把玻璃板在灌胶支架上固定好.※固定玻璃板时,两边用力一定要均匀,防止夹坏玻璃板.
3.按比例配好分离胶,用移液管快速加入,大约5厘米左右,之后加少许蒸馏水,静置40分钟.※凝胶配制过程要迅速, 催化剂TEMED要在注胶前再加入,否则凝结无法注胶.注胶过程最好一次性完成,避免产生气泡.
※水封的目的是为了使分离胶上延平直,并排除气泡 ※凝胶聚合好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面.
4.倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干,按比例配好浓缩胶,连续平稳加入浓缩胶至离边缘5mm处,迅速插入样梳,静置40分钟. ※样梳需一次平稳插入,梳口处不得有气泡,梳底需水平.
5.拔出样梳后,在上槽内加入缓冲液,没过锯齿时可拆去 底端的琼脂糖. ※要使锯齿孔内的气泡全部排出,否则会影响加样效果.
6、加样三个。 (1)取10µl标准蛋白溶解液于EP管内,再加入10µl 2倍样品缓冲液,上样量为20µl。
(2)取10µl样品1溶液,再加入10µl 2倍样品缓冲液,上样量分别为5µl 和10µl。
7.用微量注射器距槽底三分之一处进样,加样前,样品在沸水中加热3分钟,去掉亚稳态聚合。※注射器不可过低,以防刺破胶体,也不可过高,在样下沉时会发生扩散.※为避免边缘效应,最好选用中部的孔注样.
8.电泳槽中加入缓冲液,接通电源,进行电泳,开始电流恒定在10mA,当进入分离胶后改为20mA,溴酚蓝距凝胶边缘约5mm时,停止电泳。
9.凝胶板剥离与染色:电泳结束后,撬开玻璃板,将凝胶板做好标记后放在大培养皿内,加入染色液,染色1小时左右。10.脱色:染色后的凝胶板用蒸馏水漂洗数次,再用脱色液脱色,直到蛋白质区带清晰。※剥胶时要小心,保持胶完好无损,染色要充分.
以上是我实验课件,希望有所帮助!

名词解释


蒸馏水

蒸馏水是指经过蒸馏、冷凝操作的水,蒸二次的叫重蒸水,三次的叫三蒸水。低耗氧量的水,加入高锰酸钾与酸工业蒸馏水是采用蒸馏水方法取得。词条详细介绍了蒸馏的概念、蒸馏水、多次蒸馏水、蒸馏水的标准、制作方法、优点、用途;并且与去离子水、高纯度水、超纯水进行了对比分析。

缓冲液

缓冲碱指血中一切具有缓冲作用的碱的总和。其反映机体酸碱失衡总的缓冲能力。由于缓冲碱受血浆蛋白质和血红蛋白的影响,因此不能确切反映代谢酸和碱的内部稳定情况。抽动脉血,用血气分析仪测定。

10

10,相当于汉字\"十\"。是位于9与11之间的自然数、正整数。 在十进制中,10是最小的两位数,写法是一个1后面加一个0,是一个合数,有4个因数(约数),是一个有理数。

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