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电泳槽示意图 电泳槽是什么样的一种装置?

1, 电泳槽是什么样的一种装置?



【 操作步骤】
1. 点样 将醋酸纤维薄膜 (2.5cm*8cm) 一条,浸于巴比妥缓冲液,待完全浸透后,取出轻轻夹于滤纸中,吸去多余的溶液,再于薄膜的无光泽面的一端 2.0cm 处,用小玻片蘸取少许血清,垂直印于膜上,待血清渗入薄膜后,以无光泽面向下,两端用数层浸湿的滤纸 ( 或纱布 ) 贴紧,加盖,平衡 2 ~ 3min ,然后通电。
2. 通电 一般电压用 110 ~ 140V ,电流约 0.4 ~ 0.6mA / cm ,时间 45 ~ 60min 。
3. 染色 关闭电源后立即将膜取出,放入染色液中浸染 2 ~ 3min ,然后移入漂洗液中漂洗数次,至蛋白条带清晰,背景无色为止。
4. 定量 取试管 6 支,编号依次为 0 (空白)、 A 、 α1 、 α2 、 β 、 γ ,将电泳图谱亦按 A 、 α1 、 α2 、 β 、 γ 蛋白区带剪开,分别装入相应号码试管中。再在图谱两端无蛋白部位剪一条宽约 α1 带的空白带放入空白管中。各管中加 0.4mol/L NaOH 4ml ,振摇数次,使染料色泽浸出, 30min 后,在 620nm 波长下进行比色,以空白管校正零点,读取清蛋白及 α1 、 α2 、 β 及 γ 球蛋白各管的吸光度。

2, 电泳槽的电泳槽分类



血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
【实验目的】
理解电泳法分离血清蛋白质的原理,掌握醋酸纤维薄膜电泳法的操作方法。
【实验原理】
在电场中,蛋白质阴离子向正极移动,阳离子向负极移动,移动的速度受蛋白质的电荷数量的多少、分子量的大小、形状等因素影响。带电荷多的、分子量小的、球形的分子移动速度就快,反之就慢。
血清蛋白质的等电点大都在pH7以下,因此在pH8.6的缓冲溶液中都带负电荷,在电场中向阳极移动。由于不同蛋白质的电荷数、分子量的大小、形状各不相同,因此在电场中移动的速度不同。经过一段时间的电泳,就可以将血清中的蛋白质分离开来。
被分离的蛋白质是无色的,用氨基黑10B处理薄膜,可以显示出各种蛋白质电泳后在薄膜上的位置及大致含量。从正极起依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白5条区带(实验图2-3)。
【实验器材】
电泳仪、醋酸纤维薄膜(2cm*8cm)、滤纸、培养皿、剪刀、镊子、加样器(或盖玻片)、直尺、玻璃板、试管、试管架、吸量管等。
【实验试剂】
1.巴比妥缓冲液(pH8.6,离子强度0.06) 称取巴比妥钠12.76g,巴比妥1.66g。加蒸馏水500ml。加热溶解,冷却至室温后再加蒸馏水到1000ml。
2.氨基黑10B染液 称取氨基黑10B0.5g,加入冰醋酸10ml、甲醇50ml及蒸馏水40ml,混匀,在具塞试剂瓶内储存。
3.漂洗液 取95%乙醇45ml,冰醋酸5ml,加蒸馏水至50ml,混匀备用。
【操作步骤】
1.准备 将一定量的缓冲液倒入两侧的电泳槽,两侧的液面要呈水平状态。将滤纸叠成4层,剪成1.5cm~2cm宽,3cm左右长的矩形条贴在电泳槽的两侧支架上,上端搭在支架前沿上,下端伸入到电泳槽底部,浸到缓冲液中,形成滤纸桥(实验图1-1)。
在醋酸纤维薄膜(2cm*8cm)无光泽面上的一端约1.5cm处,用铅笔轻划一条直线(点样线),并将薄膜编号。然后将薄膜浸入巴比妥缓冲溶液,待浸透后(时间大约20分钟,薄膜无白斑),取出,夹在洁净滤纸中间,轻轻吸去薄膜表面的缓冲液。
2.点样 取少量血清于玻璃板上,用加样器取血清2μl~3μl均匀加在薄膜的点样线上(或用盖玻片轻蘸少许血清,点压在点样线上),待血清渗入膜内后移开点样器。点样线上出现一条粗细均匀且有一定宽度的淡黄色直线(实验图1-2)。
3.电泳 将薄膜的加样面朝下,加样端置于负极一端,平整地架在两侧电泳槽支架的滤纸桥上,平衡5分钟。然后接通电泳仪电源,调节电压为100V~160V,电流0.4A~0.6A/cm膜宽。通电40~50分钟,待电泳区带展开约3.5cm便可以关掉电源。
4.染色 将电泳后的薄膜于染色液中浸泡2分钟,取出后再依次浸入2~3个盛有漂洗液的培养皿中反复漂洗,每次漂洗10分钟左右,直到背景颜色漂净。薄膜出现5条蛋白色带,从正极依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白(实验图1-3)。
【临床意义】
肝硬化时,白蛋白显著降低,而γ-球蛋白显著升高。肾病综合症时,白蛋白显著降低,而α2、β球蛋白升高,因此在临床可以根据血清中不同蛋白质的含量情况对疾病做出辅助诊断。

名词解释


薄膜

薄膜是一种薄而软的透明薄片。用塑料、胶粘剂、橡胶或其他材料制成。薄膜科学上的解释为:由原子,分子或离子沉积在基片表面形成的2维材料。例:光学薄膜、复合薄膜、超导薄膜、聚酯薄膜、尼龙薄膜、塑料薄膜等等。薄膜被广泛用于电子电器,机械,印刷等行业。 薄膜材料是指厚度介于单原子到几毫米间的薄金属或有机物层。电子半导体功能器件和光学镀膜是薄膜技术的主要应用。

球蛋白

球蛋白是一种存在于人体中的血清蛋白,球蛋白是一种常见的蛋白,基本存在于所有的动植物体中。球蛋白具有免疫作用,因此也有人称球蛋白为免疫球蛋白。免疫系统遇到外来的入侵物时会根据入侵物的不同产生不同数量的球蛋白,如果入侵物比较难以消灭,免疫系统刺激淋巴以后就会产生更多的球蛋白直到入侵物被球蛋白消灭为止。

血清

血清是指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质,提供激素和各种生长因子,提供结合蛋白,提供促接触和生长因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。

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